除了两位水管工兄弟,游戏中的经典角色也在电影中亮相。碧姬公主作为蘑菇王国意志坚定的统治者,在片中对马力欧进行了严酷的作战训练,以帮助后者挖掘自身潜力。喜剧演员杰克·布莱克、塞斯·罗根则为片中的大反派酷霸,以及“搞笑担当”大猩猩咚奇刚配音。值得一提的还有,为游戏中的马力欧和路易吉兄弟配音长达三十余年的查尔斯·马丁内斯,也在片中友情客串。《琼糟透了》和《亨利湖》中,都提到“流莓体”Streamberry。流莓体的logo露出方式与网飞(Netflix)如出一辙,即首字母S或N放大并碎成竖形彩条铺满屏幕,证明流莓体就是网飞的化身。
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